本发明公开了一种抗TSPAN8单克隆抗体及其用途，该抗体能与TSPAN8蛋白特异性结合；所述抗体的重链可变区由如SEQ ID NO：1所示的核酸序列或其同源性序列编码；所述抗体的轻链可变区由如SEQ ID NO：2所示的核酸序列或其同源性序列编码，可用于制备治疗和/或预防由TSPAN8介导促进肿瘤细胞上皮间质转化及干性增强的分子调控机制及关键分子靶点的疾病的药物组合物。本发明提供的抗TSPAN8单克隆抗体具有高亲和力，特异性强，稳定性好，且具有抑制乳腺癌细胞系的增殖和迁移能力，且可以抑制肿瘤的生长。