本发明公开了一种大肠杆菌环腺苷酸受体蛋白突变体、基因工程菌及应用。本发明通过将大肠杆菌的环腺苷酸受体蛋白(CRP)112位氨基酸I突变为L、127位T突变为G、144位A突变为T获得CRPG菌株，与ptsG基因敲除的ΔptsG方案组合应用于生产木糖醇的大肠杆菌，菌株彻底消除CCR效应，大幅提高木糖醇浓度和生产效率，同时提高其对水解液原料中毒物和抑制因子的耐受性，直接利用离子交换前的半纤维素水解液高效生产木糖醇，简化原料处理工艺，减少设备投入，降低生产成本，减少污水排放。