本发明公开了一种抗菌肽仿生磷酸钙涂层, 包括无定型磷酸钙涂层和含抗菌肽的结晶磷酸钙涂层，无定型磷酸钙涂层和含抗菌肽的结晶磷酸钙涂层由内而外依次涂覆在待涂覆材料表层。本发明还公开了上述抗菌肽仿生磷酸钙涂层的制备方法和应用。本发明抗菌肽仿生磷酸钙涂层在生理温度和pH条件下就会发生沉积，不会破坏生物活性蛋白质的活性，且形成的晶体结构与骨质结构类似。随着磷酸钙涂层晶体的形成，抗菌肽通过共沉积结合到涂层的网络结晶中并保持活性，在生理条件下缓慢释放，从而赋予材料抗菌性能，并且不影响细胞的附着、存活、生长与分化，具有广阔的应用前景。