本发明提供了一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法及其应用，是将改性丝素蛋白溶液与预混液充分混合得到，其中，改性丝素蛋白溶液与预混液的体积比为1：3～5，所述改性丝素蛋白溶液是将丝素蛋白溶液中的丝素蛋白经二乙烯三胺五乙酸改性而得，所述预混液是由壳聚糖硫酸酯、1, 2‑丙二醇碳酸酯、第一部分蒸馏水、β‑甘油磷酸钠、泊洛沙姆188、第二部分蒸馏水混合，由于改性丝素蛋白与预混液成分均具有较多的亲水性基团，彼此之间反向胶凝，故整体在常温状态下呈液体状态，满足给药时良好的流动性，注射给药后，随着体内温度升高，逐渐凝胶化，由液体状态变为半固体凝胶状，有助于药物缓慢释放，从而达到缓释目的。