本发明公开了脯氨酸衍生物在制备β‑内酰胺酶抑制剂中的用途，脯氨酸衍生物用式(I)所示：其中，式(I)中酰胺键包含其自然存在的顺式或反式旋转异构体；R1为OH或NH2；R2为邻磺酸基苯基，邻磺酰胺基苯基，间磺酸基苯基，间磺酰胺基苯基，对磺酸基苯基，对磺酰胺基苯基或邻羧基苯甲基。经活性测试证明式(I)所示的脯氨酸衍生物对β‑内酰胺酶，特别是NDM‑1具有较好的抑制作用。通过抑制β‑内酰胺酶，特别是NDM‑1活性, 减少甚至消除NDM‑1对β‑内酰胺类抗生素的水解, 缓解NDM‑1引起的耐药性, 恢复抗生素对细菌的疗效, 从而能够治疗由NDM‑1引起的耐药细菌感染。