本发明提出了一种穿黄制剂指纹图谱的建立方法，包括如下步骤：S1.供试品溶液的制备：取1.0g穿黄制剂粉末，精密称定，置于25mL容量瓶中，加入70％甲醇20mL，超声，放冷，定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，离心，取上清液过微孔滤膜，即得；S2.高效液相色谱检测：吸取上述供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行高效液相色谱检测，记录65min内的指纹图谱。本发明采用高效液相色谱结合紫外双波长切换检测方法，建立了一个既可测定穿黄制剂的特征指纹图谱，该方法准确、高效、重复性及稳定性好，指纹图谱特征性强，含量测定结果准确，可作为穿黄制剂的质量控制方法。