本发明属于分析化学技术领域，涉及一种鸡传染性支气管炎病毒H120株的电化学检测方法及应用。本发明通过退火、S1核酸酶(S1)酶切和高温加热方式将鸡传染性支气管炎病毒H120株的RNA等量转换为能够专一性识别H120株RNA的DNA即H120‑target，基于自组装的方式将巯基修饰的核酸探针2固定于金电极表面与H120‑target孵育，引入可与H120‑target特异结合的核酸探针1修饰的金纳米颗粒以吸附电信号分子六氨合钌(RuHex)用于产生并进行信号放大，最后利用线性伏安法对吸附的RuHex进行电化学检测，通过绘制H120株浓度与电信号之间的标准关系曲线得到线性方程，依据检测所得电信号大小计算实际样品中H120毒株的含量。该方法具有成本低、灵敏性高、特异性强的优点。