本发明提供了一种从罗汉果上柱流出废液中回收高含量酸性多糖的方法，包括以下步骤：(1)废液浓缩，(2)醇沉，(3)分离，(4)洗涤，(5)复溶，(6)柱分离，(7)滤处理，(8)干燥，得到高含量罗汉果酸性多糖。本发明工艺条件温和，尽可能的避免剧烈的反应条件致使多糖降解，从而在获得高含量的同时保留其原始结构，从而保持其原有的生物活性，整个工艺使用安全、易回收、易去除的溶剂，适合产业化生产，有效地将罗汉果酸性多糖从废液中提取出来，收率和含量高，产品质量稳定，为罗汉果产品的丰富和对多糖的活性和构效关系的研究提供了便利。