本发明公开了一种利用直链麦芽低聚糖生成酶制备直链麦芽六糖的方法，属于功能糖生产技术领域。所用酶的氨基酸序列在GenBank中的编号为AIV43245.1。配制pH 6.5～7.5的淀粉或麦芽糊精溶液为底物，按2～10U/g加酶量加入直链麦芽低聚糖生成酶，在60～80℃下反应24～72小时，可制得含高浓度直链麦芽六糖的直链麦芽低聚糖浆。产物中直链麦芽六糖的百分比例可达30％以上，对底物的总转化率可达75％以上。本发明不需要中途调节pH或改变反应温度，也不需要添加钙离子和协同酶制剂，工艺简单、便捷，生产成本低廉。