本发明公开烟草酰基糖酰基转移酶基因NtASAT3及其编码蛋白及其在蔗糖酯生物合成中的应用，其编码的蛋白可以在较安全的醋酸铵缓冲液中调控蔗糖三酯的合成。烟草酰基糖酰基转移酶基因NtASAT3及其编码蛋白及其在蔗糖酯生物合成中的应用，其编码的蛋白可以在较安全的醋酸铵缓冲液中调控蔗糖三酯的合成，整个蔗糖酯生物催化反应均在醋酸铵缓冲液中进行，除了蔗糖，酰基‑COA以及催化的NtASAT1～NtASAT3蛋白外，没有其他物质加入。整个催化反应体系与以往大多数蔗糖酯合成方法中底物或溶剂需用有毒试剂相比，安全性高，反应底物简单，体系产物相对单一，所有产物均为蔗糖酯，易于后续分离及利用。因此，NtASAT3基因及其蛋白在蔗糖酯生物合成中具有较好的应用价值和前景。