本发明公开了DEV gB蛋白单抗以及检测DEV抗体的阻断ELISA试剂盒。本发明首先通过原核表达系统制备具有良好反应原性和免疫原性的gB蛋白，将其作为抗原通过细胞融合技术筛选得到一株微生物保藏编号号是CGMCC No.17996的杂交瘤细胞株，其分泌的单抗能与鸭病毒性肠炎病毒天然空间构象病毒蛋白反应且对DEV抗体具有强阻断能力；本发明还提供由该单抗所识别的抗原表位，其氨基酸序列为SEQ ID No.1所示；本发明进一步应用该单抗构建了一种检测DEV抗体的阻断ELISA试剂盒，该阻断ELISA试剂盒具有敏感度高、特异性好、重复性强等优点。