本发明公开了一种合成丁三醇油酸酯的重组菌及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。所述重组菌是以大肠杆菌为出发菌株，将编码酰基转移酶的基因、编码脂酰CoA合成酶的基因、编码烯酰ACP还原酶的基因、编码甘油激酶的基因、编码3‑磷酸甘油酰基转移酶的基因和编码DAGP磷酸酶的基因导入大肠杆菌，得到重组菌。经过发酵，实现了1, 2, 4‑丁三醇油酸酯的首次合成。本发明所构建的重组菌，在LB培养基中发酵24h，可以实现丁三醇和油酸钠的酯化，得到丁三醇油酸酯，为丁三醇的分离纯化提供新的思路。