本发明公开了一种猫艾滋病毒重组蛋白及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域，包括猫艾滋病毒抗原和猫艾滋病毒单链抗体；包括以下步骤 : (1)查找猫艾滋病毒中含有主要抗原决定簇的p24抗原；(2)优化猫艾滋病毒p24抗原基因的密码子，合成核酸序列并进行表达；(3)构建针对猫艾滋病毒p24抗原的单链抗体，调取单链抗体scFv的基因；(4)重组优化的猫艾滋病毒p24抗原基因和针对猫艾滋病毒p24抗原的单链抗体scFv的基因，并进行表达；(5)纯化及复性猫艾滋病毒重组蛋白。本发明在开发单克隆抗体的基础上又进行重组抗体技术开发单链抗体，易于在细胞中表达，可在真核或者原核细胞中表达，可大量生产，成本较低。