本发明属于医药技术领域，涉及一种靶向DNA纳米自组装体载NF‑κB decoy ODNs的制备方法及其应用。靶向DNA纳米自组装体载NF‑κB decoy ODNs由DNA四面体、NF‑κB decoy ODNs、VCAM‑1靶向多肽组成，其中NF‑κB decoy ODNs和VCAM‑1靶向多肽通过碱基互补配对原则连接到DNA纳米自组装体上。本发明的DNA纳米自组装体的平均粒径小于10nm。靶向多肽修饰的DNA纳米自组装体载NF‑κB decoy ODNs提高了基因药物的靶向性，提高了药物的体外抗炎效果，对细胞及组织基本无毒性。