本发明提供了一种基于木瓜蛋白酶为模板的铂纳米簇及其制备方法和应用。其具体包括如下步骤：将木瓜蛋白酶溶液与高价铂配合物的水溶液进行混合，然后加NaOH溶液调节pH值为8～13，避光水浴反应完全后即得。本发明制备的铂纳米簇对溶菌酶响应灵敏，检测体系操作简便、可控、耗时短，可应用于尿液中溶菌酶含量的检测。本发明制备的木瓜蛋白酶铂纳米簇极大地增强了木瓜蛋白酶的活性，故该合成物质除木瓜蛋白酶原有的应用如在医药、食品、饲料、纺织等方面外，还可基于其荧光特性用于追踪木瓜蛋白酶的应用效果及检测样品中溶菌酶的含量。