本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种多肽纳米载体及其制备方法和应用。本发明提供一种多肽构建的纳米载体，由丙氨酸，甘氨酸，等组成的短肽及胆固醇组成。本发明的所形成的多肽可在细胞自然降解，多肽中的多种氨基酸均为体内存在的氨基酸，对细胞及人体无毒副作用，CCK‑8法细胞增殖试验表明，制备的纳米载体具有很低的细胞毒性，同时又有较好的共载基因与不溶性化合物的能力，本发明的纳米载体能在乳腺癌免疫治疗中能特异性靶向肿瘤细胞，递送免疫检查点阻断剂，促进自身抗肿瘤免疫，促使乳腺癌细胞的凋亡，从而成为乳腺癌免疫治疗的一种靶向、高效、低毒的纳米级递送系统。