本发明公开了一种小鼠RBM10基因编辑位点及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO : 1所示，以pDR274载体为骨架构建插入有小鼠RBM10基因编辑靶位点T1、T2的Cas9 gRNA表达载体，可高效敲除小鼠RBM10基因的编辑位点T1、T2。这两个编辑位点可用于Cas9介导的小鼠RBM10基因打靶，制备RBM10基因修饰小鼠本发明鉴定小鼠RBM10基因的高效编辑位点，并分析其打靶效率，为构建RBM10基因内源性敲除或定点敲入外源基因的转基因小鼠提供新途径。