本发明提供一种医用组织封闭胶组合物，医用组织封闭胶及其制备方法和应用，所述医用组织封闭胶组合物，包括：第一组分和第二组分，其中，第一组分包括：含有氨基的天然物质和/或在含有氨基的天然物质上修饰有巯基的第一修饰产物，所述含有氨基的天然物质和所述第一修饰产物各自独立的具有10个以上的活性基团，其中，所述活性基团为氨基、巯基；所述第二组分包括：在壳聚糖和/或聚赖氨酸上修饰有10个以上乙烯基的第二修饰产物。本发明的医用组织封闭胶具有较高的抗破裂强度和较低的溶胀率，并且具有良好的粘合性，可以使组织创面快速闭合，有效起到组织封闭的作用，防止组织液、血液或脑脊液泄漏，能够减轻病人的痛苦，并且避免了更多的危险性。