本发明涉及一种碱性磷酸酶标记物的稀释液及其应用。所述稀释液包括缓冲液、蛋白质、表面活性剂、锌离子、镁离子、防腐剂和添加剂；所述添加剂包括阻断剂和/或碱性磷酸酶；所述碱性磷酸酶为低活性碱性磷酸酶和/或无活性碱性磷酸酶。本发明创造性地在传统的用于稀释碱性磷酸酶标记物的稀释液中添加阻断剂和/或碱性磷酸酶，能够很好地降低非特异性反应，最终降低临床样本检测假阳性结果概率，提高检测分析结果的准确率。