本发明属于海洋生物技术领域，具体涉及一种具有免疫佐剂作用的壳聚糖衍生物纳米粒及其制备和应用。通过不同分子量不同取代位点的壳聚糖负电荷衍生物和不同分子量的壳聚糖正电荷衍生物，以聚电解质复合法获得粒径153.33nm‑320.90nm、电位17.1mV‑39.30mV的壳聚糖衍生物纳米粒；所述正电荷和负电荷衍生物按质量比为6.25‑10：1‑4的比例混合。通过激光共聚焦测定表明细胞对纳米粒具有一定摄取作用，从而发挥免疫效果。为近年来壳聚糖衍生物作为免疫佐剂的研究提供一定的方法和指导。