本发明提供了芫花素在制备抗单增李斯特杆菌感染药物中的应用，通过兔红细胞溶血试验、对J774细胞的保护作用实验及小鼠感染实验治疗学实验，证明芫花素在极低浓度下可以有效抑制单核细胞增生性李斯特杆菌溶血素的成孔活性，同时能够抑制单增李斯特菌对J774细胞介导的细胞毒性作用并对单增李斯特菌引起的小鼠感染有较好的治疗作用。本发明用芫花素治疗单核增生性李斯特菌感染，较传统的抗生素治疗相比不易诱导耐药性的产生且对细菌的选择压力较低，试验中未见显著的毒性作用，且具有较高的治愈率。因此芫花素可以用于新药开发，并对药物靶标确认有着重要意义。