本发明公开了一种黑曲霉6‑4光修复酶及其构建方法，所述的黑曲霉具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列。构建方法为从现有的野生型黑曲霉中获得6‑4光修复酶基因基因An6‑4，重新设计核苷酸序列，选择大肠杆菌表达系统偏好的密码子进行优化，得到改造后的基因An6‑4' ，连接基因片段与pET22b质粒，构建出重组表达质粒；将该重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞，构建出工程菌，所述的工程菌在20℃和1mM IPTG条件下获得了较好的表达。本发明与现有技术相比，成功在异源表达系统中表达出的6‑4光修复酶，获得活性可溶蛋白，具有抗氧化能力极好，而且活性持久稳定的特点，可以在生物医药、化妆品领域应用。