本发明公开了一种定点突变的黑曲霉6‑4光修复酶及其构建方法，所述的光修复酶具有有SEQ ID NO : 1，所示的核苷酸序列。本发明从现有的WT黑曲霉中获得6‑4光修复酶基因基因序列，进行人工密码子优化之后，设计突变引物得到突变的基因片段，连接基因片段与pET22b质粒，构建出重组表达质粒；将该重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞，构建出用于光修复酶表达的基因工程菌在20℃和1mM IPTG条件下获得了较好的表达。相比于WT光修复酶，本发明表达出的突变体酶S460N的活性更高，而且活性保持更加持久稳定，能更好的修复紫外线造成的DNA损伤，更有利于作为化妆品类，医药类产品的添加成分应用于人们的生活。