本发明公开了一种体外酶反应生产L(+)‑乙偶姻的方法，步骤为：(1)将载体pET28a与2, 3‑丁二醇脱氢酶编码基因bdhA连接得到pET28a‑bdhA并导入大肠杆菌，发酵，纯化，浓缩，得到2, 3‑丁二醇脱氢酶浓缩液；将载体pET28a与NADH氧化酶编码基因yodC连接得到pET28a‑yodC并导入大肠杆菌，发酵，纯化，浓缩，得到NADH氧化酶浓缩液；(2)将2, 3‑丁二醇脱氢酶浓缩液、NADH氧化酶浓缩液、meso‑2, 3丁二醇、NAD+和FAD+混合均匀，反应，得到L(+)‑乙偶姻。本发明以廉价的meso‑2, 3‑丁二醇为底物，实现附加值高的L(+)‑乙偶姻的体外生产，产量和纯度高。