本发明公开了一种利用木糖生产乙醇酸的重组菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明提供的利用木糖生产乙醇酸的重组菌中过表达木糖脱氢酶基因，木糖酸内酯酶基因，木糖酸脱水酶基因，3‑脱氧‑D‑甘油戊酮糖酸醛缩酶基因和乙醇醛脱氢酶基因。同时，本发明还提供了该重组菌的制备方法及利用该重组菌的生产乙醇酸的方法。本发明首次实现了以D‑木糖为碳源，经乙醇醛转化形成乙醇酸的生物合成路径。