本发明公开了一种高活性人细胞因子Eotaxin‑2的制备方法及应用，包括如下步骤：步骤1：根据NCBI数据库中Eotaxin‑2的氨基酸序列，对其密码子进行了优化，人工合成目的基因；步骤2：通过设计引物在其N端引入一个或多个His标签、TEV酶切位点，并在N端和C端分别引入限制性酶切位点EcoR I和Hind III；步骤3：利用PCR技术将目的片段进行扩增，再将基因片段双酶切后连接到用相同酶切割后的载体上面，而后导入大肠杆菌中进行异源表达，生产Eotaxin‑2蛋白。本发明方法提供了一种简便、快速、低成本、高产量、高纯度的细胞趋化因子Eotaxin‑2的制备方法，并对其活性进行了验证。