本发明属于产品检验技术领域，涉及一种蛋白质水解度测定方法：将蛋白水解液以高效凝胶过滤色谱法测定多肽分子量分布，计算不同分子量范围多肽的质量百分含量，进而计算获得多肽含量、游离氨基酸含量和蛋白水解度；还能够通过准确方法测定系列不同水解程度的蛋白质标准溶液中游离氨基酸含量、多肽含量和蛋白质水解度，作出标准曲线更准确地定量。本发明利用高效凝胶过滤色谱法实现对样品中多肽含量、游离氨基酸含量和水解度的同时测定，与传统测定方法比较更加简单、快速。本发明的方法结果与传统方法的测定结果相关性、准确性高，为工业化生产寡肽的过程监测提供了快速、可靠的方法。