本发明公开了一种生产蔗糖磷酸化酶的方法及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种生产蔗糖磷酸化酶的方法，利用此方法生产蔗糖磷酸化酶的产量高且产得的蔗糖磷酸化酶比酶活高；利用此方法，将本发明的重组大肠杆菌在含有L‑阿拉伯糖、四环素以及IPTG的发酵培养基中诱导表达12h，即可使细胞破碎液上清液中蔗糖磷酸化酶的酶活高达32.43U/mL，且使产得的蔗糖磷酸化酶的比酶活高达18.5U/mg。