本发明公开了一种生产黄嘌呤的重组菌及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。该重组菌是以大肠杆菌为出发菌株，分别敲除大肠杆菌基因组上的转录阻遏蛋白基因purR、磷酸葡萄糖异构酶基因pgi、磷酸葡萄糖酸脱水酶基因edd、腺苷酸琥珀酸合成酶基因purA和GMP合成酶基因guaA，过表达D128A突变的PRPP合成酶基因prs和K326Q、P410W双突变的PRPP转酰胺酶purF。同时，本发明还提供了该重组菌的制备方法及利用该重组菌的生产黄嘌呤的方法。本发明首次实现了重组菌中黄嘌呤的高效生物合成。该重组菌适用于发酵生产黄嘌呤。