本发明公开了一种灵芝培养基、制备方法及利用培养基培养灵芝的方法。灵芝培养基包括如下质量份数的原料：玉米秸玉米芯混合体70～80份、玉米面5～10份、石灰1～5份、硫酸镁1～3份、麦麸10～20份、硫酸二氢钾1～3份、石膏1～5份和葡萄糖1～3份。灵芝培养方法包括如下步骤：灵芝菌丝体驯化培养、菌包的培养、出芝培养和采摘及后期管理。本发明取得的有益效果为：(1)通过生物驯化法，提高了灵芝菌丝体对秸秆培养基的适应性；(2)通过揉丝处理，降低了杂菌污染的几率，提高了成品率；(3)以农作物玉米秸为主料，更加经济环保；(4)通过调整培育过程中CO2的浓度，抑制芝盖生长，促进芝柄生长，提高了灵芝的观赏价值。