一种制备、分离与纯化蜂胶中蒿素C(artepillin C)活性成分的方法，先将蜂胶与乙醇混合，再以离心方式去除蜂胶乙醇混合液中的杂质，以获得蜂胶乙醇萃取液，再将超临界二氧化碳流体与蜂胶乙醇萃取液进行分离，使蜂胶乙醇萃取液分离出蜡质与蒿素C、类黄酮成分，继而将超临界二氧化碳流体与前述蜂胶中蒿素C、类黄酮成分进行分离，以分离出蒿素C成分及类黄酮成分，再静置预定时间后，利用乙醇纯化蒿素C成分。其可大量分离与纯化蜂胶中蒿素C的活性成分，且能保持蒿素C活性成分的生物活性，不需经繁复的溶剂去除与浓缩、分离程序，且无溶剂残留等安全疑虑，制作成本低，甚为环保、安全，具实用价值。