本发明公开了一种人小肠3D类器官研究P‑糖蛋白(P‑glycoprotein, P‑gp)模型的构建方法。本发明中，首先将人小肠隐窝接种于基质胶中，加入含有特定生长因子的ADMEM/F12培养基进行培养以形成3D类器官；然后进行形态观察，并从mRNA和蛋白水平检测P‑gp的表达；最后采用共孵育的方法，以罗丹明123(Rhodamine 123, Rh123)为底物，研究维拉帕米(Verapamil)和米托坦(Mitotane)对Rh123转运的影响。所述人小肠3D类器官研究P‑gp的模型可应用于P‑gp介导的药物转运研究，所述人小肠3D器官研究P‑gp的模型也可广泛应用于P‑gp抑制剂的体外高通量筛选，所述方法高效、快速。