本发明提供了含羟基微孔有机聚合物有机磷农药生物传感器及其制备方法，包括碳糊电极、乙酰胆碱酯酶层和Nafion层，所述的碳糊电极表面的修饰层从内至外依次为Hy‑MOP层、乙酰胆碱酯酶层和Nafion层。本发明的生物传感器具有较好的酶固载能力和良好的生物兼容性，具有较高的灵敏度和稳定性。在碳糊电极上依次固定Hy‑MOP悬浮液、AChE溶液和Nafion溶液，从而构建有机磷农药生物传感器，该生物传感器可用于甲基对硫磷和对氧磷的检测，其成本低廉、操作简单、灵敏度高、选择性好，对甲基对硫磷和对氧磷的检测线性范围为5.0×10‑13‑1.0×10‑8g/mL和1.0×10‑13‑1.0×10‑9g/mL。