本发明公开了一种3D打印木聚糖酶催化剂的方法及其应用，属于生物法催化降解难分解化合物技术领域。本发明确定了3D打印木聚糖酶催化剂的材料、3D打印材料对酶活的影响、3D打印的粒径、3D打印木聚糖酶催化剂的酶活及重复利用率、3D打印木聚糖酶催化剂在降解木质纤维素方面的应用。本发明操作方便，在生物催化降解木糖和制备具有空间结构可控的3D打印催化剂方面具有较好的工业应用前景，对于今后生物催化专用3D催化剂的开发及生物大分子的降解的研究具有较为重要的意义。