本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种PBMC分离装置及方法。该装置中的血样采集头(5)、分离液废液容器(6)均与第一三通阀(9)连通，清洗液采集头(7)、产品收集容器(8)均与第二三通阀(10)连通，且第一三通阀(9)、第二三通阀(10)以及离心桶(1)均与第三三通阀(11)连通，第三光电对射传感器(14)设置在第三三通阀(11)与超声流量传感器(20)之间，超声流量传感器(20)设置在第三光电对射传感器(14)与离心桶(1)之间，并且第一动力机构、第二动力机构、第一三通阀(9)、第二三通阀(10)、第三三通阀(11)、第一光电对射传感器(12)、第二光电对射传感器(13)、第三光电对射传感器(14)以及摄像头(15)均与控制器信号连接。这种分离装置分离效率较高且可靠性较高。