本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的石莼多糖组合物及其制备方法，其是将绿藻石莼利用超声波辅助提取及水提醇沉法分离获得粗制提取物后，经进一步纯化得到石莼活性多糖，再将其与制备的灵芝提取物、绞股蓝提取物、红曲米提取物，以及富硒酵母、茶多酚按比例调配制成。经动物药效学证实，所得石莼多糖组合物在KM小鼠体内对H22肝癌瘤具有显著的杀伤能力，且在免疫力不足的情况下依然能达到极佳的抑瘤效果，并无明显副作用，是一种无毒性、副作用小、十分安全的生物活性物质配方，这不仅为石莼作为海洋药物资源的进一步利用提供了新的途径，也为治疗或预防肿瘤药物的开发提供了新的选择。