本发明公开了一种采用高效液相色谱法测定复方ACC007片含量的方法，检测条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以有机相(乙腈：甲醇＝70：30)‑缓冲盐为流动相进行梯度洗脱，以紫外检测器为检测器。采用本发明所述的检测方法，使得复方ACC007片中拉米夫定(3TC)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)及ACC007均达到基线分离；并且操作简便快捷，分析时间短，成本低，能有效的检测复方ACC007片中三个成分的含量，确保产品的安全性和有效性。