本发明提供了一种脂肪酶醇解活力的荧光检测方法，所述方法是以4‑甲基伞形酮丁酸酯和C1～C4的烷基醇为底物，以脂肪酶为催化剂，在有机溶剂中，200r/min、25～50℃条件下进行醇解反应，反应完全后，将反应液离心，取上清液测试其在激发波长330nm和吸收波长390nm处的荧光值，根据4‑甲基伞形酮标准曲线计算产物4‑甲基伞形酮的浓度，进而获得脂肪酶的酶活；本发明所述非水相脂肪酶转酯化活力的检测方法的有益效果主要体现在：检测方法简单可行，原料成本低，检测耗时少，可以用于脂肪酶醇解活力的快速测定，适合常规生化实验室应用。