本发明公开了知母皂苷A‑III在制备具有抗人横纹肌肉瘤药物中的应用，属于知母皂苷A‑III的医药新用途技术领域。本发明的技术方案要点为：知母皂苷A‑III在制备具有抗人横纹肌肉瘤药物中的应用，其中知母皂苷A‑III的分子式为C39H64O13，化学结构式为：本发明所述的知母皂苷A‑III能够有效抑制人横纹肌肉瘤细胞RD的增殖，其处理RD细胞24h的半数抑制浓度4.28μM，约为对照化合物硫酸长春新碱IC50(92.86μM)的1/22。10μM知母皂苷A‑III可诱导人横纹肌肉瘤细胞RD的显著凋亡，表明本发明所述知母皂苷A‑III能够有效抑制人横纹肌肉瘤细胞的增殖，有望开发成为治疗人横纹肌肉瘤药物的有效成分。