本发明公开了一种重组质粒RBATCC3、工程菌及其产胞外多糖的应用，所述重组质粒RBATCC3核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。本发明利用含重组质粒RBATCC3的重组基因工程菌生产的胞外多糖从单糖组成成分上来看是一种新的细菌胞外多糖。大肠杆菌基因组上的4个基因ycjD、fabI、yciW和rnb调控细菌胞外多糖的分泌是一种新的发现，是对这4个基因功能新的注解。