本发明涉及一种田七跌打风湿软膏中三七含量的检测方法，包括：对照品溶液制备；供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏，加水、二氯甲烷提取；静置上步所得提取液、分取水层，加石油醚提取；静置上步所得提取液、分取水层，加正丁醇萃取；氨试液洗涤上步所得萃取液，得正丁醇液；蒸干上步所得正丁醇液得残渣，甲醇溶解，制成供试品溶液；色谱检测。本申请采用合适供试品制备工艺，能够从田七跌打风湿软膏中将三七皂苷R1提取出来进行液相色谱分析，供试品溶液中配方基质残留少、三七皂苷R1损失少、干扰成分少，于合适洗梯度下能够获得准确含量值。并且，以三七皂苷R1表征三七的含量，专属性强，不受其他药材原料化学成分干扰，重复稳定性好。