本发明公开了一种基于多种微生物的急性毒性试验方法，包括：从国家环境微生物专业菌种库中获取30‑40个不同种属的菌株为材料，备用；然后根据每一颗菌株与有毒化合物反应的剂量效应关系、系统发育多样性以及对2，3，5‑三苯基四氮唑的响应稳定性的原则筛选了10‑15株细菌和1株酵母菌放入器皿中进行培养作为受试菌；然后利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述细菌和酵母菌中培养获得集训的脱氢酶活性变化最终来评价待测样品的毒性大小。本发明选取最合适的菌种进行培养成受试菌，然后与多种微生物反应，最终快速的测试出微生物的毒性，相对灵敏度更高，效果更好，速度更快。本发明还公开了一种基于多种微生物的急性毒性试验的试剂盒。