本发明公开了一种Ⅱ型糖尿病斑马鱼模型的构建方法及应用，涉及医药技术领域。其包括如下步骤：(1)构建转基因斑马鱼；(2)采用药物对转基因斑马鱼进行造模；在步骤(1)构建转基因斑马鱼的过程中，先构建表达载体，再将表达载体与Tol2 mRNA混合，显微注射到斑马鱼胚胎中；表达载体包括pdx1基因启动子，编码荧光蛋白的基因和nsfb基因；其中步骤(2)中所采用的药物为含有硝基基团的化合物。本发明利用pdx1启动子构建胰腺组织特异表达荧光蛋白和硝基还原酶的转基因品系，对该品系用含有硝基基团的化合物诱导可特异杀死胰腺组织细胞，从而模拟II型糖尿病。