本发明公开了一种十字花科植物腈水解酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明将高山南芥腈水解酶氨基酸序列的225‑285位肽段嵌入到缺失对应肽段的芜菁腈水解酶中，获得芜菁/高山南芥腈水解酶嵌合体，进而对嵌合体BaNIT的编码基因进行定点饱和突变，获得植物腈水解酶突变体，所述的植物腈水解酶突变体为下列之一或其中两种以上：(1)第223位的L突变为Q；(2)第263位的H突变为D；(3)第279位的Q突变为E。本发明提供的植物腈水解酶突变体的催化活力提高2.23倍，重组蛋白的可溶性大幅提高，对映体选择率E值保持在400以上，在高效催化外消旋异丁基丁二腈合成(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中具有良好的应用前景。