本发明提供了一种分泌抗总黄曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株F‑3‑1，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13806。此细胞株分泌的抗总黄曲霉毒素单克隆抗体灵敏度高、特异性好、抗干扰性好，对黄曲霉毒素B1的50％抑制浓度IC50为0.046μg/L，与AFB2的交叉反应率为110％，与AFG1的交叉反应率为96％，与AFG2的交叉反应率为78％，对中药中可能存在的真菌毒素、农药、重金属、炮制过程中使用的辅料及污染菌等均具有较好的抗干扰性，为中药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总量的免疫检测提供了条件，具有实际应用价值。