本发明公开了一种高通量检测菌株耐有机溶剂氧化还原酶的方法，涉及酶检测和生物催化剂的高通量筛选。包括菌株培养、细胞破胞、进一步统一多种酶的反应条件(有机溶剂、温度、缓冲液及激活因子)、构建多种有机溶剂体系酶活性高通量检测平台等。通过在粗酶液中加入不同浓度的氯化钠，稳定耐盐、嗜盐酶的结构，使其正确折叠，减少假阴性的结果；并通过加入聚乙烯亚胺，提高氧化还原酶的稳定性，提高筛选效率。运用所建立平台可对大量菌株同时进行多种氧化还原酶耐多种有机溶剂耐受性的检测，有利于最大限度地同时挖掘所考察菌株的应用潜力, 获得工业生物催化应用所需的耐有机溶剂的氧化还原酶，并提高筛选效率，减少人力、物力及时间成本的投入。