本发明公开了L‑谷氨酸二乙酯盐酸盐及其光学异构体的分离检测方法，所述分离检测方法采用高效液相色谱法，固定相为硅胶类手性柱，流动相为反相溶剂：高氯酸水溶液‑乙腈。本发明所述方法具有分离度好、灵敏度高、专属性强等特点，可以快速、准确地对L‑谷氨酸二乙酯盐酸盐进行质量控制。