本发明涉及一种锇配合物、制备方法及其应用。所述方法包括步骤，将氯锇酸铵与二联吡啶加入到有机溶剂中反应，得到混合溶液；将还原剂加入到所述混合溶液中反应，得到锇配合物前体；按照预定比例将所述锇配合物前体与5‑氯‑2‑苯偶氮基吡啶加入到乙二醇中，在预定反应条件下反应后，加入目标阴离子，得到锇配合物。本发明所提供的锇配合物具有极高的结构稳定性，几乎不发荧光，对肿瘤细胞的细胞毒性很强，对癌细胞也具有选择性，能够应用在肿瘤细胞的拉曼成像领域。