本发明提供了一种头孢哌酮氘代内标物的制备方法，包括如下步骤：(一)Boc‑乙二胺经烷基化、脱保护得到中间体IV；(二)中间体IV经环化得到中间体V；(三)中间体V与中间体VI缩合得到中间体VII，所述中间体VI为D(‑)‑对羟基苯甘氨酸；(四)中间体VII与中间体VIII缩合得到头孢哌酮‑D5目标化合物IX，所述中间体VIII为头孢甲肟中间体。本发明所述的合成方法，工艺设计合理，所使用氘代试剂价格便宜，操作简便，实验过程可控，制备得到的目标产物纯度高，达到99％以上。