本发明公开了一种4型蓝舌病病毒VP2蛋白中和性B细胞抗原表位多肽及其应用。本发明采用噬菌体展示技术对BTV VP2蛋白抗原表位氨基酸进行筛选。经过3轮淘选后进行测序，测序结果经分析比对后获得共同的短肽序列为160NH161。实验证明，160NH161与4A‑1G7上清、腹水均发生特异性反应并且160NH161与1‑24型BTV阳性标准血清反应特异性良好。本发明的提出，对于4型BTV的临床诊断提供了新的技术手段，也为后续建立BTV的型特异性鉴别诊断方法以及4型BTV相关表位疫苗的制备奠定了物质基础。